Baculovirus-Expression-Vektor-System (BEVS) wird allgemein wegen der einfachen Durchführung, hohes Expressionsniveaus und der Fähigkeit zur Vereinigung von posttranlationalen Modifikationen als ein kraftvolles und vielseitiges Werkzeug für große Produktion rekombinanter Proteinen anerkannt. GenScripts Servicepaket von Baculovirus-Expression beinhaltet beide Virusproduktion und Proteinproduktion im flexiblen Maßstab. GenScript hat die Methoden für Sekretion rekombinantes Proteins aus Baculoviren infizierten Zellen gebahnt. Unsere Services sind für pharmazeutische und biotechnologische Industrie und akademische Institutionen geeignet. Mit großer Kapazität sind wir fähig, Kultur bis zu 500 Liter pro Projekt zu produzieren.
GenScripts Spezialisten in Proteinexpression
arbeiten eng mit Kunden zusammen, um rekombinantes Volllänge-Protein aus Volllänge-cDNA, EST-Sequenz-Information und genomische Sequenzen zu klonieren und exprimieren. Wir bieten Services und Expertise in allen Phasen der Proteinexpression und -Produktion an.
Darüber hinaus, als der größte Anbieter von Gensynthese in USA, bietet GenScript Ihnen gratis fortgeschrittene Codon-Optimierung spezifisch für Sf9, Sf21, Hi-5 und andere Insekt-Zelllinien an, um Produktivität Ihres Proteins weiter zu erhöhen. Sie können auch unser gratis „Rare Codons“-Analysetool benutzen, um zu prüfen, ob Ihre Gensequenz suboptimal ist, und die Forschungsmethoden anwenden, um die Expression Ihres Target-Proteins zu fördern. Mehr...
- BacuVanceTM
Optimierungspaket
- Standard-Paket
- Baculovirus-Präparation
- Fallbeispiele
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Für Kunden, die das bestmögliche Protokoll für ihr Projekt und anschließendes Scale-up etablieren möchten, empfiehlt GenScript die hoch entwickelte BacuVanceTM-Plattform zur Untersuchung der verschiedenen Expressionsbedingungen des Target-Proteins.
| Schritte |
Spezifikationen |
Lieferbaren |
Dauer* |
| 1. Subklonierung |
- Subklonierung in drei Expressionsvektoren
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Expressionsvektoren mit Insert |
2 Wochen |
| 2. Virus-Generation |
- Generation der rekombinanten Bakmid-DNA
- Transfektion der Insektenzellen mit rekombinanter Bakmid-DNA
- Generation von P1-Stock (Low titer), P2-Stock (High titer) und P3-Stock, Bestimmung des Titers (pfu/ml)
| 5ml, >107 pfu/ml Virusstock |
3-4 Wochen |
| 3. Expresion-Optimierung und Pilot-Protein-Production |
- Infektion der Insektenzellen mit P3-Stock
- Expression-Optimierung und Detektion:
MOI, Infektionszeit, Zelllinien
- SDS-PAGE-Gel und Western-Blot
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Expressionsdaten |
1.5 Wochen |
| 4. Expression und Reinigung |
- Expression und Reinigung von 1 L Insektenzellen
- Ein-Schritt-Reinigung
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Gereinigte Proteine
QC-Daten |
1-2 Wochen |
*Gelistet ist die typische Turnaround-Zeit bei GenScript. Bitte beachten Sie, dass zusätzliche Anforderungen weitere Schritte und dementsprechend auch mehr Verarbeitungszeit entstehen können.
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Wenn Kunden die Protokolle etabliert haben, bietet GenScript ein Standard-Paket für Baculovirus-Expression des Proteins an. Alle folgenden Schritte werden nach Anforderungen der Kunden durchgeführt.
| Schritte |
Spezifikationen |
Lieferbaren |
Dauer* |
| 1. Subklonierung |
- Subklonierung in einen Expressionsvektor
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Expressionsvektoren mit Insert |
2 Wochen |
| 2. Generation des rekombinanten Virus |
- Generation der rekombinanten Bakmid-DNA
- Transfektion der Insektenzellen mit rekombinanter Bakmid-DNA
- Generation von P1-Stock (Low titer) und P2-Stock (High titer), Bestimmung des Titers
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5ml, >107 pfu/ml Virusstock |
2-3 Wochen |
| 3. Expressions-Bewertung |
- Infektion der Insektenzellen mit P2-Stock
- SDS-PAGE-Gel und Western-Blot
Expressionsdaten |
1.5 Wochen |
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| 4. Expression und Reinigung von 1 L Insektenzellen |
- SDS-PAGE-Gel und/oder Western-Blot
- Ein-Schritt-Reinigung
Gereinigte Proteine
QC-Daten |
1-2 Wochen |
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*Gelistet ist die typische Turnaround-Zeit bei GenScript. Bitte beachten Sie, dass zusätzliche Anforderungen weitere Schritte und dementsprechend auch mehr Verarbeitungszeit entstehen können.
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GenScripts Services von Präparation des rekombinanten Baculovirus garantieren die Batch-zu-Batch-Übereinstimmung des Virus. Wir bieten verwendungsfertige hochinfizierende Virusstocks und ausfürhliche Lagerungs-Protokolle.
| Schritte |
Spezifikationen |
Lieferbaren |
Dauer |
| 1. Subklonierung |
- Subcloning into one expression vector
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Expressionsvektoren mit Insert |
2 Wochen |
| 2. Virus-Generation |
- Generation der rekombinanten Bakmid-DNA
- Transfektion der Insektenzellen mit rekombinanter Bakmid-DNA
- Generation von P1-Stock (Low titer) und P2-Stock (High titer), Bestimmung des Titers
- Verifizierung der Proteinexpression
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Virusstock |
2-3 Wochen |
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1. Projektbewertung und Hochniveau der sekretorischen Expression (6mg/L)
Die anfängliche Anforderung des Kunden war Synthese des vorliegenden Gens und Klonierung in unseren BV-Vektor für die intrazelluläre Expression. Der gewünschte Ertrag war 0,1-1 mg markierte Protein mit einer Reinheit von 70%. Aufgrund einer Sequenzanalyse haben wir eine neue Strategie entwickelt, die von dem Kunden genehmigt wurde, um die Sekretion durch das native Signalpeptid des Proteins zu treiben. Am Ende bekamen wir 3 mg Protein mit einer Reinheit von über 80% aus 0,5 L SF9 CM. Die Identität des Proteins wurde von MALDI-TOF bestätigt.
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Abb. SDS-PAGE-Analyse von dem durch SP-Säule gereinigten Target-Protein
Spur 1-8: Eluierte Fraktionen mit 1 M NaCl in 20 mM PB, pH 5,0 |
2. Reinigung des nicht markierten Protein
Nach Proteinexpression wurde das konditionierte Medium gegen Puffer dialysiert und auf SP-Säule aufgeladen. Die vorhergesagte Größe des Target-Proteins wurde 78KDa. Die SDS-PAGE-Ergebnisse zeigten, dass kleine Proteine als Target in Spur 12, 13 und 14 gekriegt wurden.
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Abb. SDS-PAGE-Analyse von dem durch SP-Säule gereinigten Target-Protein
Spur 1: Im konditionierten Medium
Spur 2-14: Eluierte Fraktionen mit NaCl-Konzentrationsgradienten von 0 bis 500 mM in 20 mM PB, pH 5,0 |
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Angebotsanfrage und Bestellung:
 Für Angebotsanfrage bitte downloaden Sie das Angebotsanfrage/Bestellung-Formular, füllen es vollständig aus und senden es uns per Email oder Fax.
 Für Bestellung bitte downloaden Sie das Angebotsanfrage/Bestellung-Formular, füllen es vollständig aus und senden es uns zusammen mit Information über ein formelles "PO (Purchase Order)" oder eine Kreditkarte per Email oder Fax. Sie können auch die Information über PO/Kreditkarte telefonisch oder via unserem sicheren Online-Messaging-System uns mitteilen.
Wenn Proben an uns gesendet werden, bitte senden Sie zusammen mit einem gedruckten und vollständig ausgefüllten Angebotsanfrage/Bestellung-Formular an: Protein Services, GenScript, 120 Centennial Ave., Suite 105, Piscataway, NJ 08854, US.
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Email für Anfrage und Bestellung: order@genscript.de |
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Bestellung per Telefon: 001-732-885-9188 (USA)
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Fax: 001-732-210-0262 001-732-885-5878 |
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