Säuger-Expressionssystem
( Mammalian Cell Expression System )

In den vergangenen zwanzig Jahren ist die Produktion des rekombinanten Proteins (r-Protein) für die biopharmazeutischen Produkte mit medizinischen Anwendungen immer nützlich. Besonders sind die gereinigten Proteine für Strukturfunktionsanalyse geeignet. Meiste r-Proteine, die in diesem Bereich verwendet werden, sind komplexe Molekülen, die für volle Bioaktivität und native Konformation posttranslational modifiziert werden müssen. In dieser Hinsicht produzieren die kultivierten Säugerzellen anspruchsvolle r-Proteine, da Sie die angemessen Maschine für Proteinrückfaltung und posttranslationale Modifikation prozessieren. GenScript empfehlt deren Säugerexpression-Service für die Fälle, in den die Proteinrückfaltung für den gedachten Anwendungen entscheidend ist, und für die Fälle, in den die interne Maschine von E.coli zur rechtzeitige und qualitative Proteinexpression unfähig ist. Unser Team für Proteinexpression ist fähig, Milligramm-Niveau von Protein aus Säugerzellen in weniger als vier Wochen zu produzieren. Die Forscher können dann die vielversprechende Spur in rascher Weise verfolgen.

Vorteile von Säuger-Expressionssystem:

• Fähigkeit zur Durchführung der posttranslationalen Modifikationen und der angemessenen Rückfaltung
• Stabile und rapid transiente Proteinexpression
• Kraftvolle Promoter (CMV, SV40) zur Regulation von Proteinexpression
• Hohe Expressionsniveau
• Großmaßstäbliche Proteinproduktion

Services beinhalten:

I. Vektor-Konstruktion und -Verbesserung

• Für entweder stabile oder transiente Expression kann GenScript cDNA-Konstrukt des Kunden entweder in Säugerexpressionsvektor des Kunden oder in unseren eigenen Vektor klonieren. Auf Antrag kann GenScript sekretorische Signale oder Tags in jeden Expressionsvektor addieren, um schließliche Aufarbeitung des Proteins mittels Affinitätschromatographie zu erleichtern. Für den komplexeren Projekten, die die spezifisch posttranslationale Modifikationen benötigen, Formation von multimetrischen Komplexen, Formation von spezifischen Disulfid-Brücke in Peptid-intern oder zwischen Peptiden, oder spezifische Glycosylierung benötigen, empfehlt GenScript deren kundenspezifische Vektoren. Wir können auch die gewünschte Gene, Genfragment, oder Fusionskonstrukt mit einem Fluoreszenzmarker wie GFP markieren. Zusätzlich können wir stabile Zelllinien mit hoher Produktivität generieren und identifizieren, die für Scale-up, cGMP-Produktion oder für die beiden geeignet sind.

II. Stabile Genexpression (SGE) für langfristige Produktionszwecke

• Durch die ganze Arbeit von Transfektion, Selektion, und Isolation von klonalen Zellpolulationen zur Auswertung der primären Klone für Produktivität und Anpassungsfähigkeit für Wachstum in Serum-freie Suspensionskultur, werden langfristige Produktionsstabilität und Skalierbarkeit geboten. Auf Antrag wird GenScript Genamplikation mittels Methotrexat und anschließende Klonierung und Banking verwenden. GenScript ist zur Durchführung der kompletten Studien auf genetischer und produktiver Stabilität in Anwesenheit und auch in Abwesenheit von selektiven Agenten voll ausgestattet. GenScript bietet Banking der Zellpopulationen als Prebank, Masterbank und Working-Zellbank an.

III. Transiente Genexpression (TGE)

• Stabile Genexpression wird durch Insertion von rekombinanten Genen in Wirtgenom erfolgt. Aber die Identifizierung und Charakterisierung von rekombinanten Zelllinien ist ein teuerer und zeitaufwendiger Prozess. Schnelle Produktionsmethoden von r-Protein sind manchmal bevorzugt, besonders für Projekte des Subvertrags oder Optimierung von großmaßstäblichen Produktionslinien. Rapide Proteinproduktion (von Milligramm bis Gramm) mittels TGE aus Säugerzellen ist für diesen Bedarf sehr geeignet. Anders als stabile Genexpression umfasst TGE in Abwesenheit von genetischer Selektion von Plasmid-DNA die kurzfristige r-Proteinproduktion, die typisch nach Transfektion nicht länger als 10 Tage dauert. Unsere transiente Genexpression benutzt Suspension-angepassten Zellen kann kleinmaßstäblich bis Milliliter und großmaßstäblich bis 100 Liter produzieren. Die Produkte, die aus geernteter Zellkultur oder aufgearbeiteter Proteinen bestehen, kann zu Kunden vier Wochen nach der Konstruktion von einem angemessenen Expressionsvektor geliefert werden. Auf Antrag kann GenScript Genkonstrukte in die hocheffizienten Vektoren, die spezifisch für TGE-System designed werden.

IV. Prozess-Entwicklung und Scale-up

• GenScript kann Systemwachstum und Produktionsmedium optimieren und eine sorgfältige Analyse von Wachstumsrate, Subkultivierungsverhältnis, Biomasse, und spezifische und volumetrische Produktivität mittels Produktivitäts-erhöhende Bedingungen anbieten. Ein Scale-Down-Modell kann auch zur Vorausberechnung der Zell-Leistung verwendet wird. GenScript verwendet ein neuartiges und hoch produktives Eigentumssystem, das sich mit vorhersehendem Hochdurchsatz charakterisiert.
• ¹⁵N- oder ¹³C-markierte Proteinexpression.

V. Aufarbeitung ( Reinigung )

• Nach dem Expressionsdauer wird Zellkultur geerntet und die Überstand oder Zellfraktion aus Anlagen für Proteinaufarbeitung gesammelt. Proteinaufarbeitung wird typisch durch Affinitätssäule aber auch durch andere Säulen inklusive Gel-Filtration, Ion-Austausch-Chromatographie und hydrophobe Chromatographie durchgeführt. Der Reinigungs-Tag wird via eine spezifische Protease entfernt, und Protein mittels Gel-Filtration weiter gereinigt.
• ¹⁵N- oder ¹³C-markierte Proteinexpression.

VI. Protein-Charakterisierung

• Nach Abschluss jeder Projekte bestätigen unsere Spezialisten, ob das Endprodukt den richtigen Spezifikationen des Kunden erfüllt. Typisch umfasst diese Bewertung eine, mehre oder alle von den folgenden: SDS-Page oder native Page, die mit angemessener Färbung, Bestimmung der Proteinkonzentration, Western-Blotting, Absorptionsspektrum, N-terminale Sequenzierung, Massenspektrometrie, NMR-Spektrometrie, und Aktivitätsassays.

Service-Spezifikationen:

Angebotsanfrage und Bestellung:

Für Angebotsanfrage bitte downloaden Sie das Angebotsanfrage/Bestellung-Formular, füllen es vollständig aus und senden es uns per Email oder Fax.

Für Bestellung bitte downloaden Sie das Angebotsanfrage/Bestellung-Formular, füllen es vollständig aus und senden es uns zusammen mit Information über ein formelles "PO (Purchase Order)" oder eine Kreditkarte per Email oder Fax. Sie können auch die Information über PO/Kreditkarte telefonisch oder via unserem sicherer Webserver uns mitteilen.

Wenn Proben an uns gesendet werden, bitte senden Sie zusammen mit einem gedruckten und vollständig ausgefüllten Angebotsanfrage/Bestellung-Formular an: Protein Services, GenScript, 120 Centennial Ave., Suite 105, Piscataway, NJ 08854, US.

Für Angebotsanfrage oder Statusverfolgung Ihrer Bestellung bitte kontaktieren Sie mit uns per Email, Telefon, Fax oder via unserem sicheren Webserver.

Unsere Kundenservice-Repräsentanten/Repräsentantinnen stehen rund um die Uhr von Montag bis Freitag zur Verfügung, um Sie zu unterstützen.

	Email für Anfrage und Bestellung: order@genscript.de
	Bestellung per Telefon: 001-732-885-9188 (USA)     Gebührenfreie Tel.-Nr.: 0-800-0006-320 (Deutschland)   0800-369-254 (Schweiz)
	Fax: 001-732-210-0262    001-732-885-5878