Fallbeispiele von Peptidsynthese
( Peptide Synthesis Case Studies )

Die lange Geschichte von GenScripts Angebot der top-qualitativen Peptidsynthese hat uns die Möglichkeit gegeben, sowohl allgemeine als auch seltene Probleme der Peptidsynthese zu untersuchen und Lösungen zu finden. Wobei wir manchmal auch mehr als eine Lösung finden.. Im Folgenden finden Sie Einzelheiten über drei spezifische Fälle als Beispiele der Kompetenz und Innovationsbreite von GenScript Methoden innerhalb der FlexPeptideTM Peptidsynthese-Plattform. Wir haben Lösungen gefunden, um die Problemebei der Synthese von Multi-Cystein-Peptiden, multi-phosphorylierten Peptiden und die extrem langen Peptiden zu umgehen.

  • FallbeispielⅠ
  • Fallbeispiel Ⅱ
  • Fallbeispiel Ⅲ

1. Multi-Cystein-Peptide

Die Synthese von Peptiden mit mehreren Disulfidbrücken kann schwierig sein. Dies ist daher der Fall, weil mehrere Disulfidbrücken in jedem Peptid, das über genug Cysteine verfügt, zufällig gebildet werden können. Nur wenige Unternehmen auf der ganzen Welt bieten Synthese-Services von Multi-Cystein-Peptiden mit zwei Disulfidbrücken an. Keine von diesen kann Peptide mit mehr Disulfidbrücken synthetisieren. GenScript hat jedoch zwei getrennte Wege entwickelt, um dieses Hindernis umzugehen. Es macht die Synthese der Peptide mit mehreren Disulfidbrücken möglich und erschwinglich.

Die erste davon ist die stufenweise Oxidation unter Verwendung verschiedener Schutzgruppen zum Schutz jedes Cystein-Paars bei der Fmoc-SPPS-Synthese. Unterschiedliche Entschutzungsbedingungen werden zur Entschützung jeder Schutzgruppe eingesetzt. Diese werden basierend auf den spezifischen Bedürfnissen des Projekts der Kunden sorgfältig ausgewählt. Mit der anschließenden stufenweisen Oxidizationen der Disulfidbrücken in der flüssigen Phase können wir Peptide mit mehr als zwei Disulfidbrücken genau synthetisieren.

Die zweite Methode funktioniert durch Faltung und Oxidation. Der Kernpunkt ist das Peptid in seiner gefalteten Form in der flüssigen Phase zu nehmen und seine Cysteine zu oxidieren um so ein Peptid zu formen, das die ursprünglichen Multidisulfisbrücken enthält. Anschießend wird die Position der Disulfidbrücken durch Zymohydrolyse orientiert.

Fallbeispiel: Peptide A
Sequenz: H - Cys - Asn - Cys - ... ... ... - Cys - ... ... ... - Cys - ... ... ... - NH2
Disulfidbrück: 1 - 11, 3 - 15
HPLC-Ergebnisse:


MS-Ergebnisse:

2. Multi-phosphorylierte Peptide

Es gibt zwei Arten von Phospho-Peptiden: Mono-AS-phosphoryliert und Multi-AS-phosphoryliert. Aufgrund seiner hohen Acidität und der Fähigkeit zur Reduzierung der Aktivierung während Fmoc SPPS ist die multi-phosphorylierte Gruppe sehr schwer zu synthetisieren. GenScript hat zwei Strategien zur zuverlässigen Synthese der Phosphopeptide entwickelt.

Die erste ist die direkte stufenweise Festphasensynthese von Phosphopeptiden mit den mono-benzylierten Phosphoaminosäuren und Fmoc-Chemie. Diese Strategie beinhaltet zwei Probleme: die Kopplung von bzl-PAA und die Kopplung der nächsten AS. Um dieses Problem zu lösen, benutzt GenScript Mikrowellen-Technologie, die die bzl-PAA koppelt. Diese Strategie macht die Synthese der Phosphopeptide so einfach wie die allgemeine Peptidsynthese.

Die zweite ist die globale Phosphorylierung, die die postsynthetische Phosphorylierung von ungeschützten Hydroxylgruppen auf einem festen Träger betrifft. Nach der Synthese können alle der phosphorylierten Positionen in einem solchen Peptid in der flüssigen Phase in einem Schritt phosphoryliert werden. Diese Methode hat den Vorteil, die Schwierigkeiten bei der Synthese von BZL-PAA direkt zu vermeiden.

Fallbeispiel: Peptide B
Sequenz: Thr- ... ... ... -pTyr- ... ... ... -pTyr-pTyr- ... ... ... -Lys
HPLC-Ergebnisse:


MS-Ergebnisse:

3. Extrem lange Peptide

Das FlexPeptideTM -System nutzt die proprietäre Ligationsmethode von GenScript, um hohe Erträge auch für sehr lange Peptide zu erreichen. Dies wird durch die Synthese mehrerer kürzerer Sequenzen mit anschließender Ligation derer mit einer hohen Effizienz geschafft.

Fallbeispiel: Peptide C
Sequenz: Val-...-Lys-Phe-....-Thr-Val-Met-....-Val-Asn-Gly-...-Arg-Glu-....-Gln
Länge: 105 AS; M.W.: 11743.78
HPLC-Ergebnisse (Grobe Probe):


MS-Ergebnisse (Grobe Probe):