バキュロウイルス発現系
バキュロウイルス発現システム（BEVS）は組み換えタンパク質を大量に生産する多用途の強力なシステムとして広く認められています。その使いやすさ、高い発現レベル、及び翻訳後修飾導入可能などの優位性によりバキュロウイルス発現システムはタンパク質発現の重要な武器になっています。GenScriptのバキュロウイルス発現パッケージにはウイルス生産と柔軟にご要望に対応できる様々なスケールのタンパク質生産両方のサービスが含まれています。GenScriptはバキュロウイルス感染昆虫細胞から組み換えタンパク質を分泌させる先端的手法を持っています。我々のサービスは学術機関から製薬会社及びバイオテクノロジー産業まで幅広く適応します。我々は現在プロジェクト当たり500Lスケールまでのタンパク質生産能力を持っています。
GenScriptのタンパク質発現専門家はクローニングとcDNA、EST配列情報とゲノム配列からの全長組み換えタンパク質の発現におき、お客様と緊密に連携し、タンパク質発現と生産の各段階における専門知識とサービスを提供します。
さらに、アメリカ最大手の遺伝子合成サプライヤーとしてGenScriptでは、Sf9, Sf21, Hi-5などの昆虫細胞でのタンパク質の生産量を一層高める先端的コドン最適化サービスを無料で提供しています。もしくは、弊社無料提供のrare codon analysis toolを使用し、ご希望の遺伝子配列の最適化を行い、ターゲットタンパク質の発現量を高めてください。詳しく
- BacuVanceTM
最適化パッケージ
- 標準パッケージ
- バキュロウイルス 調製
- ケーススタディ
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最良のプロトコルでプロジェクトを行いたいお客様には、ターゲットタンパク質発現条件を模索できる弊社の高性能のBacuVanceTMプラットホームを利用することをお勧めします。
| 重要ポイント |
仕様 |
納品物 |
納期* |
| 1. サブクローニング |
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インサートが挿入されている発現ベクター |
2 週 |
| 2. ウイルス作製 |
- 組換えBacmid DNA 作製
- 組換えBacmid DNAによる昆虫細胞感染
- • P1ストック (低力価), P2 ストック (高力価), pfu 測定P3 作製
| 5 ml, >107 pfu/ml ウイルスストック |
3-4 週 |
| 3. 発現最適化及びタンパク質実験的生産 |
- P3ストックを用いた昆虫細胞感染
- 発現最適化及び検出：MOI, タイムコース、細胞株
- SDS-PAGEとWestern-blot
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発現データ |
1.5 週 |
| 4. 発現及び精製 |
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精製タンパク質
QC データ
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1-2 週 |
*記しているのはGenScriptの標準納期でございます。
追加要望がある場合、ステップの追加により納期が多少異なることがありますのでご了承ください。
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既に確立されたプロトコルをお持ちの場合にはGenScriptの標準バキュロウイルス蛋白質発現パッケージをご利用ください。以下のすべてのステップはお客様のご要望に従って行われます。
| 重要ポイント |
仕様 |
納品物 |
納期* |
| 1. サブクローニング |
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インサートが挿入されている発現ベクター |
2 週 |
| 2. 組み換えウイルス作製 |
- 組換えBacmid DNA 作製
- 組換えBacmid DNAによる昆虫細胞感染
- P1ストック (低力価), P2 ストック
(高力価) 作製、タイター測定
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5 ml, >107 pfu/ml ウイルスストック |
2-3 週 |
| 3. タンパク質発現評価 |
- P2ストックを用いた昆虫細胞感染
- SDS-PAGEとWestern-blot
| 発現データ |
1.5 週 |
| 4. 1 L 昆虫細胞発現及び精製 |
- SDS-PAGE及び/或いはWestern-blot
- • One-step 精製
| 精製タンパク質
QC データ
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1-2 週 |
*記しているのはGenScriptの標準納期でございます。,
追加要望がある場合、ステップの追加により納期が多少異なることがありますのでご了承ください。
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GenScript社の組み換えバキュロウイルス作製サービスはバッチ間ウイルスの一貫性を保証します。我々は力価テスト済みの、すぐ使用できる感染力の強いウイルスストックと詳しい保存方法を提供します。
| 重要ポイント |
仕様 |
納品物 |
納期* |
| 1. サブクローニング |
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インサートが挿入されている発現ベクター |
2 週 |
| 2. ウイルス作製 |
- 組換えBacmid DNA 作製
- 組換えBacmid DNAによる昆虫細胞感染
- P1ストック (低力価), P2 ストック (高力価) 作製、タイター測定
- タンパク質発現確認
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ウイルスストック |
2-3 週 |
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1. プロジェクト評価及び高い分泌発現レベル(6 mg/L)
お客様の初めの要求は問題の遺伝子を合成し、細胞内発現のために弊社のBVベクターにクローニングすることでした。最初予測されたタンパク質産量は純度70%以上の、0.1-1mgのタグ付きタンパク質でした。配列分析結果に基づき我々はお客様の賛同を得た新たな方法を考案しました。それは、タンパク質自身のシグナルペプチドを用いて分泌させることです。その結果、0.5LのSF9CM培養から純度80%以上の3mgのタンパク質を得ました。得られたタンパク質はさらにMALDI-TOPで確認されました。
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Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1-8: Eluted fractions with 1 M NaCl in 20 mM PB, pH 5.0 |
2. タグなしタンパク質精製
タンパク質発現生産後、バッファーでならし培地を透析し、そのごＳＰカラムにロードします。タンパク質の予測大きさは７８ｋＤａでした。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果で示しているように、ライン12、13と14で予測と同じ大きさのターゲットタンパク質が得られています。
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Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1: The condition medium
Lane 2-14: Eluted fractions with gradient concentration of NaCl from 0 to 500 mM in 20 mM PB, pH 5.0 |
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Protein Services,
GenScript, 860 Centennial Ave.,
Piscataway, NJ 08854, US.
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月曜日から金曜日までの営業日において、弊社では24時間サービスを提供しています.
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