Baculovirus Expression System
El Sistema de Vector de Expresión del Baculovirus (BEVS) es reconocido universalmente como una herramienta poderosa y
versátil para la producción de grandes cantidades de proteínas recombinantes. Debido a su facilidad de uso, alto nivel de expresión, y habilidad de incorporar modificaciones postranslacionales, se covierte a una parte valiosa de cualquier arsenal de la expresión de proteína. El paquete del servicio de expresión de baculovirus de GenScript incluye la producción de virus y la producción de proteína a flexible escala. GenScript ha sido pionero en los métodos para la secreción de proteínas recombinantes de células de insectos infectadas por baculovirus. Nuestros servicios son adecuados para las instituciones académicas y la industria farmacéutica y biotecnológica. Nuestra capacidad actual permite producir proteínas en grandes cantidades, hasta 500 litros por proyecto.
Los especialistas de expresión de proteína de GenScript trabajan en estrecha colaboración con los clientes para clonar y expresar largas proteínas recombinantes de cADNs de larga duración, información de secuencia de EST, y secuencias genómicas, proporcionando servicios y experticias en todas las etapas de expresión y producción de proteínas.
Además, como el mayor proveedor de la síntesis del gen en EE.UU., GenScript puede proporcionarle la avanzada optimización del codón gratuira específica a Sf9, Sf21, Hi-5 y otras líneas celulares de insectos, para aumentar la productividad de su proteína. O utilice nuestra herramienta de análisis de codón raro gratuita para ver si su secuencia genética es subóptima, y explorar los medios para impulsar la expresión de su proteína target. Más info...
- Paquete de Optimización BacuVanceTM
- Paquete Estándar
- Preparación de Baculovirus
- Estudios de Casos
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Para los clientes que desean establecer el mejor protocolo para su proyecto y, a continuación, amplicar, GenScript recomienda la sofisticada plataforma BacuVanceTM para explorar las diferentes condiciones para la expresión de las proteínas target.
| Pasos |
Especificaciones |
Entregables |
Plazo* |
| 1. Subclonación |
- Subclonación en tres vectores de expresión
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Vectores de Expresión con inserto |
2 semanas |
| 2. Generación de Virus |
- Generación de ADN Bacmido recombinante
- Transfección de células de insecto con ADN Bacmido recombinante
- Generación de P1 stock (Título Bajo), P2 stock (Título Alto), P3 determine pfu
| 5ml, >107 pfu/ml virus stock |
3-4 semanas |
| 3. Optimización de Expresión y Producción de Proteína Piloto |
- Infección de células de insecto con P3 stock
- Optimización y detección de Expresión:
MOI, tiempo, líneas celulares
- SDS-PAGE gel y Western-blot
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Datos de expresión |
1,5 semanas |
| 4. Expresión y Purificación |
- Expresión y Purificación en Células de Insectos de 1 L
- Purificación de Un Paso
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Proteínas purificadas
Datos de CC |
1-2 semanas |
*La lista es el plazo normal en GenScript. Tenga en cuenta que las requisitas adicionales puedan incurrir los pasos adicionales, y durar más largo tiempo igualmente.
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Si los clientes ya han establecido los protocolos, GenScript ofrece un paquete estándar de expresión de proteína en baculovirus. Todos los siguientes pasos son ejecutados según los requisitos del cliente.
| Pasos |
Especificaciones |
Entregables |
Plazo* |
| 1. Subclonación |
- Subclonación en un vector de expresión
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Vectores de Expresión con inserto |
2 semanas |
| 2. Generación de Virus Recombinante |
- Generación de ADN Bacmido recombinante
- Transfección de células de insecto con ADN Bacmido recombinante
- Generación de P1 stock (Título Bajo), P2 stock (Título Alto), determinación del título
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5ml, >107 pfu/ml virus stock |
2-3 semanas |
| 3. Evaluación de Expresión de Proteína |
- Infección de células de insecto con P2 stock
- SDS-PAGE gel y Western-blot
| Datos de expresión |
1.5 semanas |
| 4. 1 L expresión y purificación de células de insecto |
- SDS-PAGE gel y/o Western-blot
- Purificación de Un Paso
| Proteínas purificadas
Datos de CC |
1-2 semanas |
*La lista es el plazo normal en GenScript. Tenga en cuenta que las requisitas adicionales puedan incurrir los pasos adicionales, y durar más largo tiempo igualmente.
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Los servicios de preparación de baculovirus recombinante de GenScript proporcionan la consistencia garantizada de serie a serie de virus. Proporcionamos virus stocks titulados, muy infecciosas y listos para usar, ajunto con los protocolos detallados de almacenamiento.
| Pasos |
Especificaciones |
Entregables |
Plazo |
| 1. Subclonación |
- Subclonación en un vector de expresión
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Vectores de Expresión con inserto |
2 semanas |
| 2. Generación de Virus |
- Generación de ADN Bacmido recombinante
- Transfección de células de insecto con ADN Bacmido recombinante
- Generación de P1 stock (Título Bajo), P2 stock (Título Alto), determinación del título
- Verificación de expresión de proteínas
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Virus stock |
2-3 semanas |
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1. Evaluación del proyecto y alto nivel de expresión secretora (6mg/L)
La petición inicial del clilente fue sintetizar el gen en cuestión y lo clonar en nuestro vector de BV para la expresión intracelular. El rendimiento esperado fue 0,1-1 mg de proteína etiquetada con la pureza más de 70%. Sobre la base de un minucioso análisis de secuencia, diseñamos una nueva estrategia, que fue aprobado por el cliente, para utilizar el péptido nativo de señal de la proteína para impulsar la secreción. Al final, obtuvimos 3 mg de proteínas con la pureza superior al 80% de 0,5 L SF9 CM. La identidad de proteína fue aún más confirmada por MALDI-TOF.
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Fig. Análisis SDS-PAGE de proteína target purificada por columna SP
Vía 1-8: Fracciones Eluidas con 1 M NaCl en 20 mM PB, pH 5,0 |
2. Purificación de proteína sin tag
Después de la expresión de proteínas, el medio condicionado fue dializado contra búfer, y cargado en la columna SP. El tamaño predicho de la ptoteína target fue 78KDa. Los resultados de SDS-PAGE mostraron que las proteínas del mismo tamaño con el target se había obtenido en las vías 12, 13, 14.
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Fig. Análisis SDS-PAGE de proteína targetpurificado por columna SP
Vía 1: El medio condicionadol
Vía 2-14: Fracciones eluidas con concentración gradiente de NaCl de 0 a 500 mM en 20 mM PB, pH 5,0 |
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Cotización y Pedido:
 Para solicitar una cotización, por favor, descargue y complete el Formulario de Cotización/Pedido, y envíenoslo por email o fax.
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Si presente muestras, por favor, envíelas juntos con una copia del completo Formulario de Cotización/Pedido a: Protein Services, GenScript, 120 Centennial Ave., Piscataway, NJ 08854, US.
Por las preguntas, o para solicitar las informaciones del estado de su pedido, puede ponerse en contacto con nosotros por email, teléfono, fax o a través de nuestro sistema seguro de mensajería online.
Nuestros representantes del servicio al cliente están disponibles las 24 horas de lunes a viernes para ayudarle.
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Pedir y Cotizar por email: order@genscript.es |
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Pedir por teléfono: +1-732-885-9188 (EE.UU.)
Número Gratuito: 800-098-920 (España) +1-877-436-7274 (EE.UU.) |
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Pedir por fax: +1-732-210-0262 +1-732-885-5878 |
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