Sistema de Expresión de Células Mamíferas
(Mammalian Cell Expression System)

Durante los últimos veinte años, la producción de proteínas recombinantes (r-proteínas) se ha convertido cada vez más útil en lo que respecta a productos biofarmacéuticos con aplicaciones médicas, en particular r-proteínas purificadas adecuadas para el análisis de estructura-función. La mayoría de r-proteínas aplicadas en esta capacidad es molécula compleja que necesita ser modificada postranslacionalmente para bioactividad completa y conformación nativa. En este sentido, células mamíferas cultivadas producen superiores r-proteínas porque poseen la maquinaria adecuada para el replegado de proteína y modificación postranslacional. GenScript recomienda su servicio de expresión de mamíferos para los casos en que el replegado de proteínas es crucial para la aplicación deseada del cliente y los casos en que la maquinaria interna de E.coli es incapaz para expresar la proteína en tiempo o calidad suficiente. Nuestro equipo de expresión de proteína puede producir proteínas de niveles milígramos de células mamíferas en menos de cuatro semanas. Los investigadores pueden seguir el líder alentador en una manera expeditiva.

Ventajas de Expresión de Células Mamíferas:

• Habilidad de ejecutar modificaciones postranslacionales y plegado correcto
• Expresión transitoria de proteínas estable y rápida
• Promotor poderoso (CMV, SV40) para regular expresión de proteína
• Altos niveles de expresión
• Producción de proteína a gran escala

Servicios Incluidos:

I. Construcción y mejoramiento de Vector

• Para expresión transitoria o estable, GenScript puede clonar la construcción de cDNA del cliente en el vector de expresión de mamífero del cliente o uno proporcionado por GenScript. A petición, GenScript va a añadir señales secretorios o etiquetados a cada vector de expresión para facilitar la recuperación eventual de la proteína mediante cromatografía de afinidad. Para proyectos más complejos, como los que requieren modificaciones postranslacionales específicas, la formación de complejos multimericos, la formación de enlaces disulfuros específicos dentro o entre péptidos, o glicosilación específica, GenScript le recomienda sus vectores al cliente. También podemos etiquetar el gene deseado, el fragmento del gen, o construcción de fusión con un marcador fluorescente, como GFP. Además, podemos generar y identificar líneas celulares estables de alta productividad, adecuadas para la aumenta, la producción de cGMP, o ambas.

II. Expresión de gene estable (SGE) para propósitos de producción a largo plazo

• Todo el trabajo, de transfección, selección, y aislamiento de poblaciones celulares clónales a través de la evaluación de clones primarios para productividad y adaptabilidad para el crecimiento en cultivo de suspensión sin suero, ofrece estabilidad y escalabilidad de producción a largo plazo. Previa petición, GenScript aplicará la amplificación de gene usando metotrexato y clonación subsiguiente y banking. GenScript es también totalmente equipado para ejecutar estudios completos sobre genético y productivo estabilidad en presencia y ausencia de agentes selectivos. GenScript ofrece el banking de poblaciones celulares como prebancos, masterbancos, y bancos de células de trabajo.

III. Expresión transitoria del gene (TGE)

• Expresión transitoria estable se realiza mediante la inserción de gene(s) recombinante(s) en el genoma huésped. Sin embargo, la identificación y caracterización de líneas celulares recombinantes es un proceso costoso y que consume mucho tiempo. Enfoques más rápido a producción de proteína-r a veces se prefieren, en particular para proyectos de subcontratación o la optimización de líneas de producción a gran escala. La rápida producción de proteína (desde milígramo hasta gramo) a través de TGE de células mamíferas se adecuada perfectamente a esta necesidad. En contraste con la expresión de genes estable, TGE implica la producción de proteína-r a corto plazo, por lo general la postransfección no mayor que 10 días, en ausencia de selección genética del DNA de plásmido. Nuestra expresión transitoria de gene utiliza células adaptadas a suspensión y se puede producir fácilmente tan sólo unos pocos mililitros o un máximo de 100 litros. Los productos, que consisten en fluidos de cultivo celular cosechadas, se pueden entregar al cliente cuatro semanas después de un vector de expresión se ha construido. A solicitud, GenScript puede clonar las construcciones de genes del cliente en vectores de alta eficiencia diseñados específicamente para el sistema de TGE.

IV. Desarrollo y ampliación del proceso

• GenScript puede optimizar el crecimiento del sistema y medio de producción, también proporciona un análisis exhaustivo de la tasa de crecimiento, ratio de subcultivo, masa celular, y productividad específica y volumétrica mediante condiciones de la mejora de productividad. Por otra parte, un modelo reducido se puede utilizar para predecir el rendimiento de células. GenScript utiliza un nuevo sistema altamente productivo y de propiedad que tiene característico de alto rendimiento profético.
• Expresión de proteína ¹⁵N- o ¹³C-etiquetada.

V. Purificación

• Después del tiempo de expresión ha transcurrido, los cultivos son cosechados y el sobrenadando o fracción celular es seleccionado del equipo para la purificación de proteínas. La purificación de proteína es dirigida típicamente por columna de afinidad, pero otras columnas, incluido la filtración del gel, intercambio iónico y hidrófobo, son adecuadas como siempre. El etiquetado de purificación se remueve a través de una enzima protease específica, y la proteína es purificada por filtración del gel.
• Expresión de proteína ¹⁵N- o ¹³C-etiquetada.

VI. Caracterización de proteína

• Al término de cada proyecto, nuestros especialistas confirman que el producto final satisface las especificaciones exactas del cliente. Especialmente, esta valoración incluye alguno o todos los siguientes: SDS o PAGE nativo seguida de tinción apropiada, determinaciones de concentración de proteínas, western blotting, espectro de absorción, secuenciación de terminal-N, espectrometría de masa, espectroscopia de NMR, y pruebas de actividad.

Especificaciones del Servicio:

Cotización y Pedido:

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